TP réticulocytes

26 11 2010

Qu’est-ce qu’un réticulocyte ?

Les globules rouges (érytrocytes-hématies) sont fabriqués par la moelle rouge osseuse à partir de cellules souches. Le processus de production des globules rouges met en jeu des mitoses successives et un processus de différentiation cellulaire. Au cours de ce processus appelé érythropoïèse, les cellules d’abord très basophiles ( à la coloration MGG) et grosses, deviennent plus petites et acidophiles ( 4 mitoses successives avec différentiation ). La dernière cellule produite par la dernière mitose est l’érythroblaste acidophile qui va perdre son noyau devenu inactif pour devenir un réticulocyte.

Le rétilucolcyte est libéré dans le sang circulant. C’est un érythrocyte immature qui réalise encore un peu de synthèse protéique. Son cytoplasme contient encore des polysomes, qui disparaissent en un à deux jours, donnant un globule rouge mature ( aucun organite cytoplasmique, pas de synthèse protéique.. ).

Plus l’érythropoïèse est active, plus il y a de réticulocytes libérés par la moelle osseuse rouge.

La numération des réticulocytes sanguins permet donc l’exploration de l’activité érythropoïétique.

La numération des réticulocytes est utile en cas d’anémie (manque d’hémoglobine totale circulante). Un résultat élevé indique une activité érythropoïétique compensatrice (anémie régénérative). Un résultat faible montre une anémie due à un manque d’activité érythropoïétique (anémie arégénérative).

Principe de la numération manuelle des réticulocytes:

les réticulocytes se distinguent des hématies par leur polysomes résiduels. Ces derniers ne sont pas discernables par la coloration May-Grünwald-Giemsa  le cytoplasme apparait juste un peu sali de bleu-vert au lieu d’être beige-rosé).

La technique repose sur une coloration spécifique des polysome par un bleu basique: le bleu de crésyl brillant.

Méthode:

  • transférer dans un tube à hémolyse : 3gouttes de sang bien homogénéisé + 3 gouttes de bleu de crésyl brilllant.
  • incubation: 30 minutes à température du laboratoire (ou 15 minutes à 37°C)
  • réaliser un frottis de sang bien homogénéisé, fin et régulier ( densité optimale: 150 à 300 globules rouges par champ d’observation à l’objectif X100 à immersion), séché immédiatement
  • observation: faire la mise au point à l’objectif X10 puis passer au X100 à immersion
  • vérifier que la densité globulaire est régulière et adaptée ( 150 à 300 GR  par champ)
  • compter dans un premier champ d’observation : tous les globules rouges d’une part (N1 , réticulocytes compris) et les réticulocytes d’autre part (n1).
  • passer à un champ limitrophe; ne compter que les réticulocytes (n2) et considérer que le nombre total de globules rouges n’a pas changé ( toujours N1)
  • passer à un champ limitrophe……etc .
  • pour s’assurer de ne pas faire de trop grosse erreur sur le nombre total des GR, recompter ce nombre total de GR tous les 5 à 10 champs ( selon l’homogénéité du frottis)
  • continuer jusqu’à totaliser  100 réticulocytes

Expression du résultat:

– en pourcentage : 100 réticulocytes x 100/? (N globules rouges  par champ x nombre de champs)

– en valeur absolue : Nb réticulocytes par litre de sang= pourcentage de réticulocytes x numération des globules rouges

Le résultat est exprimé en giga/L   (109.L-1 )

Norme physiologique : 20 à 80 giga/L

Observation : photos prises au lycée ( microscope Olympus BHTU, camédia Olympus)

champ général X1000 montrant 3 réticulocytes
combien de réticulocytes observés dans ce champ ?

il y en a trois. Si vous en voyez moins…cherchez mieux en vous aidant des autres photos plus loin.Il y en a un peu marqué. Si vous en voyez plus…vous confondez coloration de polysomes et traces diverses…

autres photos sur le web: http://www.leucemie-espoir.org/IMG/jpg/Doc003.jpg plus nette mais avec des couleurs moins respectueuses de la réalité.

En plus agrandi: on doit voir des fils ou grains bleu-vert pour identifier un réticulocyte

réticulo photo Ph Lacroix  3décembre et ne pas confondre avec des dépôts de colorants ou des leucocytes….comme ci-dessous

leuco coloré au bleu de crésyl brillantles leucocytes sont colorés par le bleu de crésyl brillant…

au passage remarquez le mauvais séchage de ce frottis ( hématies rétractées  »en oursins »).

Objectif Bac: savoir réaliser la coloration, savoir réaliser un frottis fin et homogène , savoir identifier les réticulocytes.

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